恭喜您获得成就：养死293
恭喜您获得成就：养死293293T细胞是293细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。
ATCC链接参考：
293是经人腺病毒5(Ad5)转染而形成的人胚肾细胞永生化细胞系。293T细胞是293细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。
基础信息
- 全称：人胚肾细胞 293T
- 营养体系：90% DMEM (GIBCO ) + 10% FBS（1% P/S）
- 形态：上皮样，贴壁生长
- 倍增时间：20h左右
- 传代比例：1:4-1:6，每2-3天换液一次
- 传代周期：24-48 h
注意事项
1. 贴壁较弱
细胞贴壁比较弱，因此在遇到运输低温及震荡、室温静置太长时间、添加的培养基或其他试剂过冷、密度较高、聚集未吹散、加液吹打到细胞面等情况时会出现明显的成片脱落现象，此时若脱落现象不严重应尽快放回培养基继续培养，若呈大片脱落的情况时需要收集细胞重新消化吹散并接种；建议使用经过包被或者高贴壁培养瓶培养细胞，尽量避免接触低温或密度过高；
2. 细胞本身偏嗜酸性，消耗培养基较快
细胞在略微偏酸性的环境下生长状态会比偏碱性的好，注意培养基pH控制；细胞密度达到70%以上时，培养基消耗会很快，注意及时观察并换液。
3. 细胞生长聚集成岛状
细胞呈岛状聚集生长，逐步向外侧扩散直至完全融合；
4. 细胞聚团后很难再吹散
细胞传代过程中一定要注意吹散细胞，接种密度不要过高，否则接种后细胞聚团将很难再吹散，会形成类似球状的聚集体贴壁生长，培养条件合适的情况下细胞会逐渐摊开生长，但若培养条件无法有效促进细胞贴壁，可能会长时间呈球状增殖；
传代总结
细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段时期。在一代中，细胞培增3～6 次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100 个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。细胞接种2～3 天分裂增殖旺盛，是活力最好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。
- 培养基37℃水浴预热。
- 先尽量吸干净培养皿中的旧培养基，收集于15ml离心管，再加3-4ml 无菌常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；
- 加1ml左右0.05% Trypsin，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层，将培养器皿放入37度培养箱消化；
- 消化到细胞间隙变大，有“泥沙样脱落”时，回加2-3ml旧培养基，以血清终止胰酶消化；
- 混匀细胞，800rpm离心3-5min，弃上清；
- 加新的完全培养基轻轻重悬细胞，按比例均匀分到新的培养瓶里（密度约为3×10⁵/mL），补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
冻存总结
- 先将细胞按传代步骤消化、离心，至传代步骤5，弃上清，获得细胞沉淀；
- 加入适量预先配好的程序性冻存液（以90%FBS + 10%DMSO为例）轻轻重悬细胞，并将细胞悬液转移至做好标记的冻存管中，冻存密度约为3 × 10⁶ /mL）
- 将冻存管放入冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；
复苏
- 从80℃冰箱容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
- 从37℃水浴中取出冻存管，于超净台中打开盖子，用枪头吸出细胞悬液，加到15ml离心管中（离心管中已预先加入了3ml细胞完全培养基），轻弹混匀。
- 离心， 800 rpm（约150G），5 min。
- 弃去上清液，轻轻敲打重悬细胞，加入完全培养基，轻弹重悬细胞，调整细胞密度，接种培养皿，37℃培养箱静置培养。
一些心得
- 细胞状态不可逆，伤了就是伤了。
- 长得快，1/6传两天能长满就算生长状态OK。
- 不要过度消化，不要过度吹打。
- 聚团的原因大概率是因为上一次消化时候没有消化彻底，导致细胞还是抱团的；另外一种原因就是上一代汇合度太高了，细胞都重叠起来了，导致消化无法特别彻底。也可能是细胞状态不好了。
- 细胞看起来饱满，触角少、短，是健康美丽的标志，变圆了就要小心一些了。
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