NK-92/NK-92MI培养指南
NK-92/NK-92MI培养指南作为同源细胞，NK-92 与 NK-92MI细胞存在诸多共性，但二者在培养方式及注意事项上不尽相同。
NK-92 细胞，是从外周血单核细胞衍生来的、IL-2 依赖型 NK 细胞株。NK-92MI 细胞，源自 NK-92 细胞的 IL-2 非依赖的 NK 细胞株。亲本细胞 NK-92 通过微粒体基因转化法，用逆转录病毒 MFG-hIL-2载体携带的人 IL-2cDNA 进行转化。
作为同源细胞，NK-92 与 NK-92MI细胞存在诸多共性，但二者在培养方式及注意事项上也不尽相同。
注意事项
NK-92MI 与 NK-92细胞同源，在培养方法上也有很多共同之处。但由于两者对 IL-2敏感程度不一，培养操作时略有差别。具体步骤如下：
- NK-92 与 NK-92MI细胞都为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数细胞分散，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片；
- NK-92 细胞对 IL-2 敏感。培养基中 IL-2 降解，将导致细胞状态变差。IL-2在 - 20℃解冻后置于4℃冰箱保存，4℃保存不应超过两周。配制好的新鲜培养基要尽快用完，建议每次使用前拿出来常温预热，不要放培养箱预热，使用完毕后放回4℃冰箱保存；
- 实验室常备 IL-2，发现细胞状态不好、散在细胞变多、细胞不生长等情况，以200 U/ml 的浓度添加 IL-2，培养 2-3 天后即可恢复状态；
- NK-92MI 细胞虽然对 IL-2 不敏感，正常培养不需要补加IL-2，但如果发现细胞状态不太好，散在细胞变多，细胞不生长等情况，也可以以
200150U/ml 的浓度补加 IL-2，培养 2-3 天后状态会有改善。
- NK-92 与 NK-92MI 细胞都对离心敏感。正常培养时，换液周期为2~3天，建议交替使用半量换液和离心换液法，即半量换液 2~3次后，离心全量换液一次。尽量减少离心次数，细胞状态不佳或细胞量少的时候，一般不建议离心；
换液方法
补液法：每 2~3天补加适量（根据培养容器和原来细胞悬液体积来定，T25 瓶一次补液 1~2毫升即可）新鲜培养基（NK-92 需要同时补加 200150/ml IL-2，而 NK-92MI则不需要），补加 2-3 次之后，离心全部换液。
半换液法：以 T25 瓶子（瓶中装有 5ml培养基）为例，竖起瓶子静置一段时间（竖瓶前轻拍培瓶，让轻贴底部的细胞团浮起来），待细胞沉底（肉眼观察细胞沉底情况），小心吸出2.5ml 上清转移到离心管，离心 800 rpm 5min，离心后的细沉淀用 2.5ml新鲜培养重悬后放回原瓶继续培养。
细胞生长时，聚集的细胞团会逐渐增大，正常的细胞团在显微镜下呈现白色透亮状。若细胞聚集太多，出现细胞团中部发暗时，可传代；
传代方法：将细胞团用移液器轻轻吹散（一般吹 2-3次即可，吹打力度不可过大，否则会出现大量死细胞和细胞碎片），均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量培养基。细胞对营养要求很高，千万不能团块太大，这会导致营养不足；细胞团块过大时，需要稍微吹散，注意控制吹打次数，不需要全部吹散。
细胞冻存
推荐使用 90%FBS+10%DMSO 的冻存液配比，NK-92 细胞可适量补加IL-2，NK-92MI 无需添加；细胞冻存的时候，尽量吹散细胞，注意控制吹打力度。
细胞复苏
NK-92MI 与 NK-92 细胞的复苏培养方法相同，操作步骤如下：
- 复苏后，用 5ml 新鲜培养基，重悬细胞；
- 瓶子竖着（瓶盖朝上）放进培养箱，以增加细胞局部密度，瓶盖保持透气；
- 细胞生长需要稳定的环境，可每天观察 1 次，不要频繁拿出培养箱观察；
- 每 3 天补液一次，补充 1-2ml 新鲜培养基即可，补加 1-2次之后半量换液，不要频繁离心；
- 观察到培养基明显变黄，细胞团块明显变大后可以分瓶，一次传代最多分一瓶同等大小培养瓶。
一些经验
减少离心次数，控制传代时的吹打次数。团块需要吹散，但不用刻意吹散成单颗；
正常传代或者离心换液后吹打，控制吹打次数以及力度，即使细胞都分散成单个，也会在1~2 天内聚集起来；
细胞团太大时，需要分散；
细胞冻存的时候，细胞需要尽量分散，否则影响冻存效果；
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